《家庭药师》 目的:探讨Z-没药甾酮（Z-GS）对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及药理机制。方法:脑微血管内皮细胞制作氧糖剥夺模型体外模拟缺血性脑卒中,培养的脑微血管内皮细胞分为对照组、模型组、 Z-GS低、中、高(12.5,25,50μmol·L-1)剂量组。给药组细胞在OGD造模前分别给予不同剂量的Z-GS处理。在机制研究中,50μmol·L-1 Z-GS+抑制剂组在造模给药前加入PI3K抑制剂LY294002。试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）释放和血管活性物质水平;免疫印迹分析磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达及磷酸化水平;LY294002用于特异性抑制PI3K表达。结果:Z-GS给药可提高细胞活力、降低LDH释放。同时Z-GS可通过降低内皮素-1和血栓素B2水平、升高血栓调节蛋白和6-酮-前列环素1α水平缓解血瘀。机制研究表明,Z-GS给药可激活PI3K/AKT/eNOS通路,增加一氧化氮（NO）的生成。而在LY294002特异性抑制PI3K后,Z-GS对该通路的调控作用消失。结论:Z-GS可通过调控血管活性物质发挥血管内皮保护作用,其机制与激活PI3K/AKT/eNOS通路,进而促进NO的生成有关。 目的:探讨乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖及糖酵解的影响。方法:制备乌梅丸含药血清,MTT法检测乌梅丸含药血清对SW1990细胞增殖的影响,并筛选最佳含药血清浓度;检测不同作用时间(0,12,24 h)乌梅丸含药血清对SW1990细胞乳酸累积的影响及细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)蛋白的表达水平,初步探索乌梅丸含药血清影响胰腺癌细胞增殖与胰腺癌糖酵解的关系。结果:乌梅丸含药血清可明显抑制人胰腺癌SW1990细胞的增殖活性,并且从作用12 h后乳酸累积量明显降低(P<0.05或P<0.01),糖酵解反应相关HIF-1α、PFKFB3蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:乌梅丸可抑制胰腺癌细胞的增殖,其机制可能是通过抑制HIF-1α及糖酵解关键限速酶PFKFB3的表达,抑制肿瘤细胞糖酵解,减少乳酸堆积,改善肿瘤酸性微环境而实现的。
目的:探讨黄芩-白芍药对治疗慢性结肠炎的作用机制。方法:采用中药系统药理学分析平台(TCMSP)对黄芩、白芍活性成分进行收集、筛选,并对活性成分潜在靶点进行预测与筛选,用Cytoscape 3.6.1软件构建活性成分-潜在靶点网络;用DisGeNET数据库预测慢性结肠炎的作用靶点,将其导入蛋白质相互作用网络数据库(STRING 11.0)分析其靶点蛋白质-蛋白质的相互作用(PPI),导入Cytoscape 3.6.1软件构建慢性结肠炎相关的PPI网络。用Merge工具将黄芩-白芍药对活性成分-作用靶点网络与慢性结肠炎的靶点PPI网络进行合并,构建黄芩-白芍药对活性成分-潜在靶点网络。用ClueGo插件进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并绘制活性成分-作用靶点-信号通路作用网络。选取PPI网路度值前3的蛋白与黄芩-白芍共有成分以及成分靶点网络度值靠前的10个成分进行分子对接验证,在Protein Data Bank数据库中检索获得受体蛋白白细胞介素6(IL-6)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARg)、肿瘤坏死因子(TNF),利用PyMOL 2.3.4软件对受体蛋白进行去水、去配体等操作,采用AutoDockTools软件对12个受体蛋白进行加氢、平衡电荷等修饰,用Grid程序对每个受体蛋白进行处理,利用AutoDock Vina 1.1.2对3个受体蛋白与10个主要配体小分子分别进行分子对接,通过结合能评分对受体与配体的结合进行初步验证。结果:得到黄芩-白芍药对治疗慢性结肠炎潜在活性成分31个,作用靶点11个,分别为对氧磷酶1(PON1)、芳香烃受体(AhR)、过氧化氢酶(CAT)、纤维连接蛋白1 (FN1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CG)、PPARg、趋化因子CCL2、肿瘤蛋白p53(TP53)、IL-6、TNF。GO功能富集分析得到有8条生物学过程,KEGG通路注释分析获得肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、白细胞介素-17信号通路(IL-17 signaling pathway)、糖尿病并发症中的糖基化终产物和受体信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)、疟疾(malaria) 4条信号通路。结论:黄芩、白芍治疗慢性结肠炎主要作用靶点为IL-6、PPARg、TNF,结合最紧密的成分分别为黄芩素、β谷甾醇、谷甾醇,主要作用通路为IL-17信号通路。
目的:探讨半枝莲醇提取物（EESB）对结直肠癌细胞HCT-116克隆形成和凋亡的影响及可能机制。方法:HCT-116细胞分为不同剂量(0,200,400,800μg·ml-1)EESB组、circ0092283小干扰RNA（si-circ0092283）组、小干扰RNA阴性对照（si-NC）组、400μg·ml-1EESB+circ0092283过表达载体（pcDNA-circ0092283）组、400μg·ml-1EESB+miR-198抑制剂（anti-miR-198）组,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测circ0092283和miR-198表达。收集30例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,培养HCT-116和肠上皮细胞HIEC-6,RT-qPCR法检测组织和细胞中circ0092283和miR-198表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ0092283和miR-198调控关系。结果:不同剂量(200,400,800μg·ml-1)的EESB作用于HCT-116细胞或干扰circ0092283表达后,HCT-116细胞克隆形成数和细胞中Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞内Bax蛋白表达升高（P<0.05）。结直肠癌组织和HCT-116细胞中circ0092283呈高表达,而miR-198呈低表达。circ0092283靶向负调控miR-198。EESB抑制circ0092283表达,而促进miR-198表达;过表达circ0092283或抑制miR-198表达可降低EESB对HCT-116细胞克隆形成、细胞凋亡和Bal、Bax蛋白表达的影响。结论:EESB可能通过调控circ0092283/miR-198轴降低结直肠癌HCT-116细胞的克隆形成能力,并促进HCT-116细胞凋亡。
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