《康颐》目的探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制。方法体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉积蛋白(ECM)Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达情况;Western blot法检测细胞上细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、磷酸化促分裂原激活激酶1(p-MSK1)、IκB、p-IκB、p65、p-p65的蛋白表达情况。结果 CCK-8法结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)均可抑制MCs的增殖活力;高内涵系统成像结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)可抑制HG诱导的MCs的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,BBR(90μmol/L)能降低ECM上的Col-Ⅳ、FN的表达水平;Western blot实验结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)能降低MCs上p-ERK、p-MSK1、p-IκB、p-p65蛋白的表达水平。结论 BBR可能调节MCs上的ERK/NF-κB的信号通路,改善HG诱导的MCs异常增殖。 目的探讨不同的培养条件包括母代细胞的生长状态及细胞密度对U251细胞增殖及凋亡的影响及相关机制。方法细胞增殖实验检测U251细胞在不同的培养条件下(母代细胞的生长状态及细胞密度)的生长情况,Western blot检测p-ERK1/2、cleaved-caspase3、cleaved-caspase8、p27、cyclin D1、p-PLK、p-FPAK的表达。Caspase3活性实验检测细胞凋亡。流式细胞实验检测细胞周期及增殖。结果将平台期U251细胞重新种植高密度即PH组,细胞快速增殖;将指数期U251细胞重新种植高密度即EH组,细胞增殖缓慢并伴随细胞脱壁。EH组细胞表达cleaved-caspase3、cleaved-caspase8,且caspase3活性升高,提示细胞发生凋亡。流式细胞实验显示EH组细胞发生G2阻滞,Western blot显示cyclin D1、p-PLK1表达下调,而p27表达上调。促进FAK的表达并不能抑制细胞凋亡。功能性p27的高表达抑制EH组细胞发生凋亡,并促进细胞增殖。结论母代细胞的生长状态及细胞密度影响U251细胞的增殖及凋亡,功能性p27的表达在维持脑胶质瘤细胞的增殖及存活中起到重要作用。 目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。探讨Ghrelin受体拮抗剂（D-Lys3）-GHRP-6对高脂饮食（HFD）诱导的肥胖小鼠的脂肪炎症和氧化应激的改善作用及机制。方法 4周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为常规饮食（RD）、高脂饮食（HFD）和HFD+（D-Lys3）-GHRP-6组。饲养16周后分析各组小鼠的体质量、体脂率和体脂成分,收集各组小鼠的血液和脂肪组织。酶联免疫吸附法检测小鼠单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-10。HE染色评估脂肪细胞直径及脂滴水平。免疫荧光染色及流式细胞术分析脂肪组织血管基质成分（SVF）巨噬细胞的数量及表型。检测各组血清中总超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、黄嘌呤氧化酶（XO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、黄嘌呤脱氢酶（XDH）的活性。结果 HFD组小鼠体质量、体脂率、附睾白色脂肪组织（eWAT）、皮下白色脂肪组织（sWAT）、肩胛间脂肪组织（iBAT）及脂肪细胞直径、iBAT脂滴水平均较RD组显著升高（P<0.05）;但在HFD+（D-Lys3）-GHRP-6组上述指标较HFD组均有明显下降（P<0.05）。与HFD组相比,HFD+（D-Lys3）-GHRP-6组血清IL-6、TNF-α、MCP-1及MDA、XO和XDH活性均明显下降,而IL-10及SOD、CAT和GPx活性均升高（P <0.05）;并且e WAT组织冠状结构（CLS）数、SVF中巨噬细胞总数、巨噬细胞M1表型下降而M2表型升高（P <0.05）。结论 （DLys3）-GHRP-6可能通过抑制促炎性巨噬细胞募集并加速其M1表型向M2表型转换和维持氧化应激平衡来缓解HFD诱导的肥胖和脂肪炎症。 探讨甲状腺结节子宫球蛋白相关蛋白1（UGRP1）的表达与甲状腺结节性质、功能及BRAFV600E基因突变的关系。方法 153例甲状腺组织取自131例以甲状腺结节为主诉的患者,根据细针穿刺细胞学检查（US-FNAC）结果分为甲状腺结节组（47例）、桥本甲状腺炎组（38例）、甲状腺癌组（46例）,正常甲状腺组（22例）取自良性结节旁正常甲状腺组织。通过免疫组化方法分析甲状腺细胞UGRP1的表达,分析4组患者UGRP1表达情况,UGRP1阳性组和阴性组甲状腺功能、超声特征以及与BRAFV600E基因突变的关系。结果桥本甲状腺炎、甲状腺结节和甲状腺癌组UGRP1阳性表达率分别为71.1%、4.3%和2.2%,正常甲状腺组织中UGRP1表达阴性,差异有统计学意义（P<0.05）。TT3、TT4、TSH在UGRP1阳性组和阴性组差异无统计学意义。UGRP1表达与BRAFV600E基因突变之间存在相关性（P=0.023,C=0.414）。结论甲状腺结节中,桥本甲状腺炎UGRP1阳性高表达,UGRP1可能作为区分桥本甲状腺炎与正常甲状腺和甲状腺癌的参考指标之一。 探讨突发性聋(SSHL)患者的发病季节规律性。方法收集10年间348例SSHL患者的临床资料,并按照性别、年龄、单/双耳、伴随症状和诱因分为不同的亚组,应用圆形分布法分析总体及各亚组患者发病时间的季节规律性。结果 SSHL的总体发病无显著的季节规律性,但呈现出春秋季多、夏季最少的季节性趋势;男性组具有显著季节规律性(P<0.05),以秋季发病最多;高血压组和高血糖组均有显著季节规律性(P<0.05),且发病均集中在寒冷的季节;其余各亚组均无显著的季节规律性。结论 SSHL发病具有春秋季多、夏季最少的季节性趋势,男性组、高血压组和高血糖组的发病具有显著的季节规律性。
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