《益寿宝典》目的建立保元汤标准汤剂的超高效液相色谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)特征图谱,并建立同时测定人参皂苷Rb1和甘草酸2种指标成分含量的方法,为该经典名方的质量控制及评价提供参考。方法采用ACQUITY BEH Shied C18 column(2.1×100 mm,1.7μm)色谱柱,以0.01%甲酸水(A)-0.05%甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱,柱温30℃,流速0.4 mL min-1,检测波长203 nm、237 nm。建立15批保元汤标准汤剂的UPLC特征图谱,应用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件(2012版)进行相似度分析,归属共有峰。采用层次聚类分析(HCA),主成分分析(PCA)等对特征图谱数据进行评价。利用UPLC特征图谱方法测定2种成分含量。结果建立了15批保元汤标准汤剂的特征图谱,相似度均大于0.85,并确认了21个共有峰,指认出毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草酸6个峰。15批保元汤聚为4类,载荷散点图显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷、人参皂苷Rg1等7个成分含量对保元汤质量有较大影响。含量测定显示,在一定范围内人参皂苷Rb1、甘草酸线性关系良好(r≥0.997)。标准汤剂中含量测定结果分别在12.62-30.33μg·mL-1、63.80-106.67μg·mL-1,转移率分别在51.04%-70.06%、54.89%-74.38%;对应实物中含量测定结果分别在0.98-2.27 mg·g-1、4.42-8.74 mg·g-1,转移率分别在78.14%-101.19%、89.99%-99.88%。结论建立的保元汤UPLC特征图谱及双指标成分含量测定方法专属性强、灵敏度高,可为该方剂复方制剂的质量控制与评价提供参考。通过粪便代谢组学技术,考察通阳化浊方与四妙勇安汤在治疗动脉粥样硬化家兔中的作用机制。方法 40只白兔,雄性,每组10只,随机分为4组,包括空白组、模型组、通阳化浊方组与四妙勇安汤组。空白组给予8周正常饮食;模型组和两个给药组以高脂饲料喂养,4周后,用球囊法手术损伤实验兔的右侧颈总动脉;两个给药组在术后,分别每日1次灌胃给予通阳化浊方和四妙勇安汤至第8周。模型组与实验组每组抽取3只家兔,采集粪便后,用LC-MS技术进行粪便代谢组学检测,运用PCA与OPLS-DA分析法来寻找差异性表达的代谢物和代谢途径。结果相较于模型组,通阳化浊方与四妙勇安汤组分别存在59和48个差异化合物,通阳化浊方组涉及20条代谢通路,5条主要代谢通路分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、花生四烯酸代谢、视黄醇代谢、苯丙氨酸代谢以及淀粉和蔗糖代谢;四妙勇安汤组涉及15条代谢通路,4条主要代谢通路包括酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢、苯丙氨酸、亚油酸代谢和花生四烯酸代谢。结论在治疗动脉粥样硬化模型家兔的过程中,通阳化浊方与四妙勇安汤在粪便代谢组学方面存在差异性代谢产物,干预相应的代谢通路,可能会对药物的作用产生影响。
使用Meta分析的方法评价补肾中药对于原发性骨质疏松慢性疼痛的有效性。方法检索PubMed、中国知网、维普、万方、Sinomed、Cochrane数据库,根据Cochrane制定的标准,由2名研究者独立评估临床数据资料,纳入相关要素,并使用Review Manerger 5.3对纳入研究Meta分析。结果最终纳入24个随机临床试验,共2422例原发性骨质疏松症患者伴慢性疼痛患者。把原发性骨质疏松症分为绝经后骨质疏松症与老年性骨质疏松症两亚组进行分析。在绝经后骨质疏松症及老年性骨质疏松症两个亚组中,疼痛VAS评分及腰椎骨密度在3个月、6个月时,补肾中药联合西药疗法在缓解骨质疏松慢性疼痛和提高骨密度方面都优于单用西药,且差异均有统计学意义。结论补肾中药在改善原发性骨质疏松慢性疼痛的症状的同时,可以提高患者骨密度。从代谢组学角度探讨柴芍六君汤改善慢性萎缩性胃炎(CAG)肝郁脾虚证大鼠代谢紊乱的可能作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白组10只、造模组22只。造模组采用化学诱导、饥饱失常和夹尾刺激法建立CAG肝郁脾虚证大鼠模型,造模10周后进行模型评价。将成模大鼠随机分为模型组和柴芍六君汤组,每组10只。柴芍六君汤组予浓度为0.51 g·mL-1柴芍六君汤10 mL·kg-1·天-1灌胃,空白组和模型组予等体积灭菌饮用水灌胃,共给药4周。一般行为学观察,苏木素-伊红(HE)染色观察胃黏膜组织病理形态,核磁共振氢谱技术(1H-NMR)识别胃黏膜组织代谢物表达变化,代谢通路分析。结果造模组大鼠神态疲惫,行为抑郁,大便溏结不调,胃黏膜固有腺体明显萎缩、炎性细胞浸润,符合CAG肝郁脾虚证表现。经柴芍六君汤给药后,模型大鼠一般行为学和胃黏膜组织病理改善。1H-NMR代谢组学检测出15个与CAG肝郁脾虚证密切相关的胃黏膜组织代谢物,柴芍六君汤干预后回调泛酸、2-羟基丁酸、甲基丙二酸、甲硫醇、乳酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、溶血磷脂酰胆碱、谷氨酸、N-乙酰基天冬氨酸、顺式5-四氢十六烷基肉碱、腺苷、脂质含量(P> 0.05或P> 0.01),共得到D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸生物合成代谢这3条关键代谢调节通路。结论柴芍六君汤能够保护和修复CAG肝郁脾虚证模型大鼠胃黏膜,回调差异代谢物的紊乱,其主要治疗机制可能与D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、精氨酸生物合成代谢通路调控有关。
基于网络药理学采用数据挖掘的方法分析抗癌精方治疗结直肠癌的作用及其作用机制。方法通过TCMSP数据库检索获得抗癌精方的化学成分,然后根据药代动力学参数筛选出其活性成分,通过Swiss Target Prediction Database对活性成分进行靶点预测;检索TCMNPAS、OMIM、TTD和DrugBank数据库获得结直肠癌的作用基因,二者映射获得抗癌精方治疗结直肠癌的关键活性成分和核心靶点;进一步分析核心靶点对应的生物学功能及相关的信号通路,选取前10条通路所包含的基因与核心靶点进行映射获得与抗癌精方治疗结直肠癌关联程度较高的信号通路;最后通过CCK8实验、流式细胞术测细胞凋亡和Western blot验证抗癌精方对结直肠癌细胞HCT116的抑制作用及其作用机制。结果研究共筛选出抗癌精方的关键活性成分26个,对应核心靶点145个,取GO分析前10条生物信息,获得信号通路前10条与抗癌精方治疗结直肠癌的关联度排序。细胞水平验证了抗癌精方可以抑制结直肠癌HCT116细胞增殖,升高细胞凋亡率,且呈浓度依赖性;Western blot实验显示抗癌精方可降低p-PI3K、p-AKT、Bcl-2的蛋白表达,升高cleaved caspase3和Bax的蛋白表达,表明抗癌精方具有诱导结直肠癌HCT116细胞凋亡的作用,可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路的调控实现,这与网络药理学的分析结果相互印证。结论本研究创新性的采用网络药理学方法结合实验验证初步探索抗癌精方治疗结直肠癌的作用及其机制,为后续深入的基础研究奠基,为临床应用提供客观支持。
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